استخدام اختبار التراص بالمستضد والمصل وحيد النوعية

البروسيلات لا تفرز ذيفانات خارجية وتعتمد امراضيتها على المعقد الشحمي السكري والبروتيني المتواجد في الجدار البكتري للبروسيلة الملساء، ويحتوي هذا المعقد على المستضدات M, A
البروسيلة المجهضة Br.abortus تكون كمية المستضد M<A بنسبة 1/20
البروسيلة المالطية Br.melitensis تكون كمية المستضد A<M بنسبة 1/20
البروسيلة الخنزيرية تكون كميتا المستضدين متساويتين تقريباً عند معظم الأنماط الحيوية
أما البروسيلة الغنمية والبروسيلة الكلبية فيحتوي المعقد الشحمي السكري البروتيني مستضدات سطحية خشنة تشبه مستضدات الذراري الخشنة للبروسيلة المجهضة والبروسيلة الخنزيرية.

**للتفريق بين أنواع البروسيلات ولتصنيف أنماطها المصلية يمكن تطبيق اختبار التراص على الشريحة ويستخدم مصل ضدي وحيد النوعية للمستضد (Monospecific antiserum M) ومصل ضدي وحيد النوعية للمستضد A. وأيضاً مصل ضدي وحيد النوعية للمستضدات R الخشنة. وعند استخدام المصل وحيد النوعية للمستضد M فقط والمصل وحيد النوعية للمستضد A، والمصل وحيد النوعية للمستضدات الخشنة في اختبار التراص على الشريحة.
نلاحظ حدوث التراص بالمصل وحيد النوعية A للبروسيلة المجهضة، والبروسيلة الخنزيرية ولا يحدث تراص للبروسيلة المالطية، لأن كمية المستضد A، في المالطية قليلة لا تسمح بحدوث التراص وعلى العكس نلاحظ حدوث التراص بالمصل وحيد النوعية M للبروسيلة المالطية، والبروسيلة الخنزيرية ولا يحدث تراص للبروسيلة المجهضة لأن كمية المستضد A في المالطية لا تسمح بحدوث التراص ويحدث المصل الضدي وحيد النوعية للمستضدات الخشنة R تراص البروسيلات الغنمية والبروسيلات الكلبية، وذراري البروسيلات الخشنة الأخرى.





عاثيات الجراثيم هي فيروسات تتطفل على أنماط مصلية لأنواع معينة من الجراثيم تسبب انحلالها (Bacteriophages).
لذلك تستخدم عاثيات نوعية للبروسيلات (Brucella phages) للتفريق بين أنواع البروسيلات ولتحديد أنماطها المصلية، العاثيات الخاصة بالذراري الملساء للبروسيلة هي (tb) تيبليسي، (wb) وايبردج، (Fi) فايرنز، و(BK2) بيركيلي، أما العاثيات الخاصة بالذراري الخشنة فهي R/C – 9 – R/O.





يمكن اختيار العاثيات التي ذكرت في التحديد الروتيني للاختبار: وهو أعلى تخفيف للعاثية يسبب تحللاً كاملاً لخلايا البروسيلة الثوي. كما تستخدم العاثيات في الجرعة RTD × 410 فالمستعمرات النامية على الآجار الانتقائي للبروسيلة تؤخذ منها مسحة وتمسح مرة أخرى من جديد على الآجار الانتقائي المصلي بالديكستروز، ويترك الطبق لعدة دقائق حتى يجف سطح المنبت.
بعد الجفاف تنقط قطرة من كل نوع من أنواع العاثيات في المكان المخصص على سطح الطبق المزروع بالبروسيلات في درجة حرارة الغرفة يترك لعدة دقائق ثم يحضن في درجة حرارة 37مْ، وبجو غاز Co2 (%10-5) لعدة أيام، يفحص بعدها الطبق وتلاحظ البقع التي يحدث فيها الانحلال بتأثير العاثيات خلال 48 ساعة، ثم يكرر فحص الطبق كل 24 ساعة، وتسجل النتائج.





الفحص المجهري المباشر:

يمكن تحضير شرائح من محتويات معدة الجنين النافق، خزع من العقد الليمفاوية، أو خزع من نقي العظام، فلقات المشيمة المطروحة، الإفرازات الرحمية – تثبت بالتسخين ثم تصبغ بزيل نلسن المعدلة (فوكسين – حمض الخل – ازرق الميتلين) بعد الغسيل والجفاف تفحص بالعدسة الزيتية الغاطسة.

الحالة الإيجابية:
تلاحظ جراثيم البروسيلات ملونة بلون زهري متجمعة داخل البالعات أو خارجها ويمكن الاعتماد على الأضداد التألقية لتشخيص البروسيلة باستخدام المجهر التألقي.
العينات:
الجنين النافق: تؤخذ عينات من محتويات معدة الجنين من العقد الليمفاوية، من نقي العظام.
الحيوان الحي: الإفرازات الرحمية أو المهبلية، فلقات المشيمة، الأغشية الجنينية الحليب أو اللبأ، الذي يحتوي في المليلتر الواحد في الحليب على عدة آلاف من جرثوم البروسيلة.
الذكور: من السائل الزليلي المفصلي – عينات من البربخ والخصية.



المرجع العلمي كتاب علم الأحياء الدقيقة الخاص
// د. إبراهيم الرفاعي & د. أنـور العمـر//

يتبع..............

__________________

الدكتور محمد علي جهاد عسكر
مدير العلاقات العامة والإعلان

syria-vet@hotmail.com

العينات الداخلية: من نقي العظام والعقد الليمفاوية أو محتويات الجنين أو اللبأ تكون غير ملوثة بالجراثيم الأخرى أما عينات المشيمة أو الفلقات الجنينية تكون ملوثة بجراثيم أخرى غير البروسيلات لذلك يضاف إلى المنابت الانتقائية للبروسيلات صادات حيوية للجراثيم السلبية والإيجابية غرام وصادات فطرية وخمائرية بتراكيز مثبطة لنمو الجراثيم المصاحبة وغير مؤثرة على البروسيلة مع منشطات لنمو البروسيلة كالمصل ولهذا يستخدم آغار الدكسترور المصلي المعدل من قبل فاريل أو آغار آلبيمي الانتقائي (Al bimi) أو مستنبت Castanoda لزرع الدم.

 عينات الحليب يجب تثفيلها لمدة 10دقائق /3000 g ثم يزرع الراسب وطبقة الدهن.
 محتويات معدة الجنين تفرد عدة قطرات من هذه المحتويات على المستنبت الجامد الانتقائي.
 الأغشية الجنينية والفلقات المشيمية وقطع الطحال والرئة للجنين تغسل بالمحلول الملحي الفيزيولوجي المعقم، ثم تقطع إلى قطع أصغر في الحجم، ويمسح الوجه الداخلي المقطوع على سطح المنبت الانتقائي، أو نلجأ إلى تجانس العينة بأن نجرشها في مجرشة يدوية بالطحن أو آلية وتزرع على سطح المستنبت الجامد الانتقائي.
 تحضن المستنبتات المزروعة بجو من Co2 بنسبة %10-5 بدرجة 37مْ بين أسبوع وعشرة أيام.




عينات الحليب تثفل لمدة 10 دقائق /g3000. ثم يحقن 2-1ملل من الراسب والدهن الطافي في العضل.
 الإفرازات المهبلية – فلقات المشيمة – الأغشية الجنينية، شديدة التلوث من الضروري تجانسها بالمحلول الملحي ومن ثم حقن 1-0.5 ملل من كل عينة في قبعتين في العضل وتقتل القبيعة الأولى بعد 3 أسابيع، والثانية بعد 6 أسابيع من الحقن.


المرجع العلمي كتاب علم الأحياء الدقيقة الخاص
// د. إبراهيم الرفاعي & د. أنـور العمـر//

يتبع..............

__________________

الدكتور محمد علي جهاد عسكر
مدير العلاقات العامة والإعلان

syria-vet@hotmail.com